Nyheter

Javascript er for øyeblikket deaktivert i nettleseren din.Noen funksjoner på denne nettsiden vil ikke fungere hvis JavaScript er deaktivert.
Registrer deg med dine spesifikke detaljer og det spesifikke stoffet av interesse, og vi vil matche informasjonen du gir med artikler i vår omfattende database og sende deg en PDF-kopi umiddelbart.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Institutt for infeksjonssykdommer, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu-provinsen, 215000 Tlf.svulster i fordøyelsessystemet med en 5-års total overlevelse på 14,1 %.Mange pasienter med HCC er diagnostisert på et avansert stadium, så tidlig screening er avgjørende for å redusere dødeligheten fra HCC.I tillegg til vanlig brukte deteksjonsindikatorer som serum alfa-fetoprotein (AFP), linselektin-reaktivt alfa-fetoprotein (AFP-L3) og unormalt protrombin (vitamin K-mangel-indusert protein II, PIVKA-II), væskebiopsiteknikker Det har vist seg å være av diagnostisk verdi ved påvisning av HCC.Sammenlignet med invasive prosedyrer, kan væskebiopsi oppdage sirkulerende maligne metabolitter.Væskebiopsiteknikker oppdager sirkulerende tumorceller, sirkulerende tumor-DNA, sirkulerende RNA og eksosomer og brukes til tidlig screening, diagnose og prognostisk evaluering av HCC.Denne artikkelen gjennomgår molekylærbiologien og anvendelsen av ulike væskebiopsiteknikker for å isolere lovende biomarkører som kan være levedyktige alternativer for tidlig vurdering av HCC for å forbedre tidlig screening av høyrisiko HCC-grupper.Nøkkelord: væskebiopsiteknikk, hepatocellulært karsinom, høyrisikogruppe .
Hepatocellulært karsinom (HCC) er en vanlig ondartet svulst i fordøyelseskanalen, rangert på sjetteplass blant nye tilfeller av ondartede svulster hos både menn og kvinner.1 På verdensbasis er leverkreft den tredje ledende årsaken til kreftdød etter lunge- og tykktarmskreft, og står for 8,3 % av kreftrelaterte dødsfall fra alle ondartede neoplasmer.1 Prognosen for HCC er nært knyttet til stadiet ved diagnose.Hovedårsakene til dårlig overlevelse ved HCC er intrahepatiske metastaser, portalvenøse tumortromber og fjernmetastaser som utelukker reseksjon, og mange av disse egenskapene er allerede tilstede hos pasienter ved diagnosetidspunktet.
Basert på retningslinjer for diagnostikk og behandling er de viktigste risikofaktorene for å utvikle HCC levercirrhose, kronisk hepatitt B-virus (HBV) eller hepatitt C-virus (HCV) infeksjon, alkoholisk fettleversykdom og ikke-alkoholisk fettleversykdom (NAFLD) ).2 I tillegg inkluderer risikofaktorer for HCC aflatoksin-kontaminert matinntak, schistosomiasis, andre årsaker til skrumplever, en familiehistorie med leverkreft, diabetes, fedme, røyking og medikamentindusert leverskade.35- og 45 år gamle høyrisikogrupper bør ha regelmessige legekontroller.Tidlig screening er en viktig tidlig behandlingsstrategi for å forbedre den totale overlevelsen til pasienter med HCC.
Biomarkører som AFP, AFP-L3 og PIVKA-II anbefales for tidlig screening av HCC3,4.Teknikker for flytende biopsi har vist lovende resultater i tidlig diagnose og behandlingsevaluering.5,6 Det er gjort betydelig fremgang i HCC-væskebiopsi, som kan ha høyere sensitivitet og spesifisitet enn vanlig brukte serummarkører som AFP (tabell 1).
AFP er en mye brukt biomarkør i HCC og er for tiden den mest detaljerte biomarkøren som er mye brukt for tidlig screening, diagnose og evaluering av sykdommen.Et vedvarende forhøyet AFP-nivå anses som en risikofaktor for progresjon av HCC.7,8 Deteksjonsraten for små hepatocellulært karsinom (sHCC) øker med utviklingen av ultralyd og datatomografi, og AFP har vist seg å være spesielt ufølsom for påvisning av hHCC i klinisk praksis.I følge en retrospektiv multisenterstudie9 ble AFP-positiv funnet i 46 % (616/1338) av HCC-tilfellene og 23,4 % (150/641) av sHCC-tilfellene.I tillegg er AFP-nivåene forhøyet hos pasienter med kronisk leversykdom og skrumplever.10 Dermed har AFP en begrenset screeningseffekt for sHCC.11 I følge Asia-Pacific Clinical Practice Guidelines for Hepatocellular Carcinoma, er bruk av AFP ikke anbefalt.12 Klinisk bevis tyder på at PIVKA-II er overlegen AFP i behandlingen av HCC og at kombinasjonen av PIVKA-II og AFP har en høyere diagnostisk verdi i HCC.13 Sammenlignet med vevsbiopsi, oppdager væskebiopsi først og fremst tumorassosierte metabolitter i kroppsvæsker (blod, spytt, pleuravæske, cerebrospinalvæske eller urin) og er mindre invasiv for vev.14 I tillegg kan flytende biopsier reflektere ondartede trekk som ikke finnes i primært tumorvev.15 Flytende biopsier blir ennå ikke testet i klinisk praksis for alle typer svulster, men deres diagnostiske potensiale ved kreft tiltrekker seg oppmerksomheten til onkologer.16 Væskebiopsi kan oppdage sirkulerende tumorceller (CTC), sirkulerende tumor-DNA (cDNA), sirkulerende fritt RNA (ecRNA) og eksosomer.I denne artikkelen vil vi diskutere egenskapene, rollen og anvendelsen av ulike væskebiopsiteknikker i tidlig screening av høyrisiko HCC-grupper.
Ekstracellulært DNA (cfDNA) i blodprøver fra friske individer ble først beskrevet i 1948 av Mandel et al.17 cfDNA er et cellefritt DNA-fragment med en lengde på omtrent 160–180 bp, og stammer hovedsakelig fra lymfocytter og myeloidceller.ctDNA er et spesifikt mutant DNA-fragment frigjort av tumorceller i det perifere blodet, som representerer den genomiske informasjonen til tumorceller etter visse patofysiologiske prosesser, inkludert nekrose, apoptose og utskillelse.Andelen av ctDNA i totalt cfDNA varierer mye med tumortype, og cDNA-fragmenter er rapportert å typisk være mindre enn 167 bp lange.18 Underhills studie viste at cfDNA-fragmenter generelt er kortere enn normalt cfDNA.19 Sammenlignet med friske individer er den totale lengden av cfDNA-fragmenter i blodet til kreftpasienter kortere, så cfDNA kan brukes som en indikator på tidlig tumorscreening.Anrikning av visse undersett av cfDNA-fragmentlengder kan forbedre påvisningen av cDNA assosiert med ikke-metastatiske solide svulster.Studier har vist at ctDNA finnes i over 75 % av avansert kreft i bukspyttkjertelen, tykktarmen, blæren, mage-tarmkanalen, leveren, eggstokkene, brystkreft, melanom og hode- og nakkekreft.20,21 Mengden ctDNA i blodet avhenger imidlertid av plasseringen av svulsten.22 I en studie av Bettegoud ble det funnet at pasienter med kolorektal-, bryst-, lever-, lunge- og prostatakreft hadde høyere nivåer av cDNA i blodet enn andre kreftformer.I kontrast, hos pasienter med munnhulekreft, bukspyttkjertelkreft, magekreft og gliom, var cDNA-konsentrasjonen i blodet lavere.tjueen
Fordi ctDNA inneholder de samme genetiske mutasjonene som primære tumorceller, kan cDNA brukes til å oppdage heterogene tumorspesifikke mutasjoner og epigenetiske endringer, inkludert metylering, hydroksymetylering, enkeltnukleotidvariasjoner og kopiantallvariasjoner.tjue-tre
DNA-metylering er en av de vanligste epigenetiske endringene som resulterer i genundertrykkelse.Sammenlignet med normale celler er det forskjeller i det totale nivået av metylering av tumorcellegenomet, spesielt i metylering av tumorsuppressorgener, som kan oppdages på et tidlig stadium, noe som tyder på at endringer i DNA-metylering kan være en indikator på tidlig påvisning av tumorigenese.Tumorsuppressorgener assosiert med HCC kan inaktiveres ved promotormetylering, og stimulerer derved tumorigenese.24 DNA-metylering er en ideell markør for tidlig diagnose av svulster på grunn av dens vevsspesifisitet, påvisbarhet og aldersuavhengighet.I tillegg er DNA-metylering mer vanlig sammenlignet med somatiske mutasjoner fordi det er flere målregioner og flere endrede CpG-steder i hver region av målgenomet.25 I tillegg til flere CpG-steder, er et stort antall uavhengige hypermetylerte loci i ctDNA identifisert i DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 og RGS10.26 Xu et al.Sammenligning av cfDNA-prøver fra 1098 HCC-pasienter og 835 friske kontroller var at gener assosiert med HCC ble funnet å korrelere sterkt med de tilsvarende plasma-cDNA-metyleringssignaturene.25 Basert på laboratorieanalyse ble det utviklet en prediktiv modell som inneholdt 10 metyleringsmarkører med sensitivitet og spesifisitet på henholdsvis 85,7 % og 94,3 %, og disse markørene var sterkt korrelert med tumormasse, tumorstadium og respons på behandling.Disse resultatene indikerer at bruken av cDNA-metyleringsmarkører er lovende i diagnostisering, overvåking og prognose av HCC.I en metyleringsmodell bestående av tre avvikende metylerte gener (APC, COX2, RASSF1A) og ett miRNA (miR203) presentert av Lu et al27, var sensitiviteten og spesifisiteten til modell 27 for diagnostisering av HBV-assosiert HCC sammenlignbar.80 %.I tillegg kunne modellen oppdage 75 % av udiagnostiserte HCC-pasienter med et AFP-nivå på 20 ng/ml.Genet for det Ras-assosierte domenefamilien 1A-protein (RASSF1A) er den viktigste repeterende DNA-sekvensen i det menneskelige genomet.Araujo et al.konkluderte med at hypermetylering av RASSF1A-promotoren kan være en verdifull biomarkør for tidlig screening av HCC og et potensielt molekylært mål for epigenetisk terapi.28 I en studie ble serum RASSF1A promoter hypermetylering funnet hos 73,3 % av pasientene med HCC.29 Langt interspersed nukleotidelement 1 (LINE-1) er en annen svært aktiv retrotransposisjonsmediator.Hypometylering av LINE-1 ble funnet i DNAet til 66,7 % av HCC-serumprøvene og var assosiert med tidlig tilbakefall og dårlig overlevelse etter radikal reseksjon.29 Hypermetylering er en vanlig genetisk prosess som spiller en unik rolle i utviklingen av levercirrhose og HCC.30 Derimot er hydroksymetylering en demetyleringsprosess som induserer genreaktivering og ekspresjon, og påvisningen av 5-hydroksymetylcytosin (5-hmC)-produktet i denne prosessen kan brukes til å identifisere en svulst.Metylering og hydroksymetylering av cDNA er assosiert med tumorigenese og kan bidra til tidlig screening av HCC.I en studie av 2554 forsøkspersoner ble 31 genomomfattende 5-hmC-er funnet i cfDNA-prøver, og 32 gener ble identifisert ved å sammenligne 5-hmC-sekvenser i HCC-pasienter og høyrisikogrupper som de med kroniske sykdommer.Diagnostiske modeller for leversykdommer.og skrumplever.Denne modellen var overlegen AFP ved å skille HCC fra ikke-tumorvev.
Mutasjoner i kodende regioner kan føre til transkripsjonelle abnormiteter, noe som kan føre til endringer i proteinsekvenser og til slutt kreft.Enkeltnukleotidvarianter er viktige genomiske markører for tidlig tumorscreening på grunn av deres høye vevspålitelighet og høye tumor- og vevsspesifisitet.Tallrike HCC-relaterte studier som bruker neste generasjons sekvensering (NGS) for eksom- og helgenomsekvensering av kreft har identifisert vanlige muterte cellulære gener som TP53 og CTNNB1, samt flere inkludert ARID1A, MLL, IRF2.De nye genene, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 og JAK1 viser moderate mutasjonsrater. Mutantgenfunksjonsanalyse antyder at endringer i kromatinremodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT signaltransduksjon, P53-cellesyklusveien, epigenetiske modifikatorer, oksidativt stressveier, PI3K/AKT/MTOR-veien og RAS/RAF/ MAPK-kinasevei spiller avgjørende roller i HCC-onkogenese.32,33 I en studie der tumorassosierte mutasjoner ble påvist, fant Huang et al at frekvensen av tumorassosierte mutasjoner avhengig av ctDNA var 19,5 %, og spesifisiteten var 90 %. .34 I tillegg var pasienter som opplevde vaskulær invasjon mer sannsynlig å ha ctDNA-mutasjoner (P=0,041) og kortere residivfri overlevelse (P<0,001). Mutantgenfunksjonsanalyse antyder at endringer i kromatinremodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT signaltransduksjon, P53-cellesyklusveien, epigenetiske modifikatorer, oksidativt stressveier, PI3K/AKT/MTOR-veien og RAS/RAF/ MAPK-kinasevei spiller avgjørende roller i HCC-onkogenese.32,33 I en studie der tumorassosierte mutasjoner ble påvist, fant Huang et al at frekvensen av tumorassosierte mutasjoner avhengig av ctDNA var 19,5 %, og spesifisiteten var 90 %. .34 I tillegg var pasienter som opplevde vaskulær invasjon mer sannsynlig å ha ctDNA-mutasjoner (P=0,041) og kortere residivfri overlevelse (P<0,001).Mutantgenfunksjonsanalyse antyder at endringer i kromatinremodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT-signalering, P53-cellesyklusvei, epigenetiske modifikatorer, oksidativt stressveier, PI3K/AKT/MTOR-vei og RAS/RAF/MAPK-kinasevei spiller en kritisk rolle i HCC tumorigenese.32,33 I en studie som fant tumorassosierte mutasjoner, viste Huang et al.fant at frekvensen av ctDNA-avhengige tumorassosierte mutasjoner var 19,5 % og spesifisiteten var 90 %.34 кее того, уациентов с сосистой инвазией чаще встречч и и и и и и и и и иAL = и и и и и и и и и ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж и ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж ыж и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и и иAL. .34 I tillegg hadde pasienter med vaskulær invasjon flere cDNA-mutasjoner (P=0,041) og kortere sykdomsfri overlevelse (P<0,001).Funksjonell analyse av mutantgenene avslørte kromatinremodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT-signalering, P53-cellesyklusveien, epigenetiske modifikatorer, den oksidative stressveien, PI3K/AKT/MTOR-veien og RAS/RAF/MAPK kinasevei spiller en kritisk rolle i onkogenese av HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 I en studie som fant tumorassosierte mutasjoner, viste Huang et al.fant at tumorassosierte mutasjoner var 19,5 % avhengige av cDNA med en spesifisitet på 90 % 34. I tillegg var det mer sannsynlig at pasienter som hadde gjennomgått vaskulær invasjon utviklet cDNA.мутация (P = 0,041) og более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutasjon (P=0,041) og kortere sykdomsfri overlevelse (P<0,001).Et annet vanlig HCC-drivergen er TP53, som har en mutasjonsrate på over 30 %.Studier har vist at frekvensen av TP53-mutasjoner i ctDNA i blod og urin varierer fra 5 % til 60 %.35 Johans studie viste at ctDNA-mutasjonsspekteret i sen HCC har en lignende mutasjonsrate som tidlig HCC, inkludert TERT-promotoren (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutasjoner i AXIN1 ., ARID2, KMT2D og TSC2 (6 % hver).36 β-catenin (CTNNB1) onkogenet spiller en viktig rolle i Wnt-signalveien.Transkripsjonskoaktivatoren CTNNB1 kan fremme genuttrykk, noe som kan føre til celleproliferasjon, hemming av apoptose og angiogenese.CTNNB1 kan også samhandle med TERT for å indusere hepatocytttransformasjon.33 TERT-promotoren er ofte mutert i noen solide svulster.Endringer i TERT, en av de tidligste genetiske endringene i malign transformasjon av HCC, kan føre til telomerasereaktivering i cirrhotiske hepatocytter og kan fremme spredning og forhindre aldring.Mutasjoner i 33-37 TERT-promotoren er rapportert å forekomme hos 59-90 % av pasientene med proliferative leverknuter og tidlig HCC og er assosiert med overlevelse.38
Kopinummerendringer (CNA) er en viktig undertype av somatiske mutasjoner.Forskning har vist at den utbredte og fokale byrden av CNA er en genomisk signatur som er i stand til å forutsi tumorimmuninfiltrasjon og eksklusjon i noen typer kreft.39 Aktiv infiltrasjonssignalering, høy cytolytisk aktivitet, alvorlig betennelse og genetiske markører assosiert med antigenpresentasjon i HCC.Analyse av datamatrisen av enkeltnukleotidpolymorfismer hos 477 personer avslørte en lav belastning på CNS.Derimot viste kromosomalt ustabile svulster med en høy omfattende CNA-belastning tegn på immunavvisning og var assosiert med spredning, DNA-reparasjon og TP53-dysfunksjon.Xu et al.viste at HCC-gruppen hadde høyere CNA-skåre enn gruppen med kronisk leversykdom.40 Ved å bruke hel-genomsekvensering av en enkelt celle, ble CNA funnet å vises tidlig i hepatokarsinogenese og forbli relativt stabile under tumorprogresjon.41 Chung et al.fant at cfDNA-nivåer var betydelig forhøyet hos HCC-pasienter og at genomomfattende CNA-er i cfDNA var en viktig uavhengig prognostisk markør hos HCC-pasienter behandlet med sorafenib.42 Pasienter med høyere CNA-byrde hadde større sannsynlighet for sykdomsprogresjon og død enn de med lavere CNA-byrde.Ollerich et al.fant at kopinummerinstabilitetsindeks (CNI) kan brukes til å vurdere CNA i cfDNA til kreftpasienter.De bemerket at pasienter med avansert kreft hadde signifikant høyere CNI-score enn en kontrollgruppe, som vurderer pasientrespons på systemisk kjemoterapi og immunterapi.43 Disse resultatene tyder på at CNA funnet i flytende biopsiprøver kan tjene som prognostiske indikatorer hos pasienter med avansert kreft.HCC på bakgrunn av systemisk terapi.
Foreløpig kan metodene som brukes for å oppdage ctDNA deles inn i målrettede og ikke-målrettede metoder.Kort fortalt er målrettede metoder som digital polymerasekjedereaksjon (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq og Tam-Seq svært følsomme for forhåndsdefinerte gener.Off-target metoder som helgenomsekvensering og NGS gir en omfattende oversikt over hele det genomiske landskapet.44 Sammenlignet med målpaneler kan helgenomsekvensering oppdage ikke bare punktmutasjoner og -innsettinger, men også omorganiseringer og kopiantallvariasjoner.prognose, og CTC og cfDNA er gode indikatorer som kan brukes til dynamisk overvåking av HCC.45 I tillegg kan cfDNA-analyse være mer nyttig for å påvise HCC.Yan et al.viste at cfDNA i plasma hos pasienter med HCC var signifikant høyere enn hos pasienter med leverfibrose og friske kontroller.Sammenlignet med AFP forventes ctDNA å være en bedre screeningsmarkør for tidlig HCC.46 I en prospektiv studie av 47 flytende biopsier som testet cfDNA og protein i en populasjonspopulasjon, ble de vist å være effektive for å skille pasienter med HCC fra pasienter uten HCC.I en oppfølging av 331 ultralyd normale og AFP-negative pasienter, var sensitiviteten og spesifisiteten til cfDNA for diagnostisering av HCC henholdsvis 100 % og 94 %, slik at cDNA kunne oppdage HCC hos asymptomatiske HBsAg seropositive individer.I Yeo48-studien ble det funnet en høy frekvens (92,5 %) av hypermetylering av RASSF1A-promotoren hos pasienter med HCC.I tillegg har Xu et al.laget en diagnostisk modell for å forutsi HCC ved å bruke et panel av spesifikke metyleringsmarkører med en spesifisitet og sensitivitet på henholdsvis 90,5 % og 83,3 %.Panelet gjør at pasienter med HCC kan skilles fra pasienter med andre leversykdommer, som er bedre enn AFP.De fant også at normale kontroller som testet positivt kan ha risikofaktorer for HCC, for eksempel HBV-infeksjon eller en historie med alkoholbruk.25 Vi antar at høyrisikofaktorer for HCC kan fremme hypermetylering av cfDNA, som deretter bidrar til progresjonen av HCC, og dermed kan cfDNA spille en nøkkelrolle i screening for høyrisikogrupper.Cai et al.oppsummere hele spekteret av ctDNA-mutasjoner og tilby en robust strategi for å vurdere tumorbelastning hos pasienter.49 Denne strategien kan identifisere tumorgenese en median på 4,6 måneder før bildeendring og har vist overlegen diagnostisk ytelse sammenlignet med serumbiomarkører AFP, AFP-L3 og PIVKA-II.Den diagnostiske verdien av cDNA-testing er påvist når bildeevaluering ikke er tilgjengelig, så cDNA-testing er av verdi ved diagnostisering av tidlig HCC i høyrisikogrupper.Nylig brukte forskere NGS-teknologi for å analysere indikatorer på multivariat genetisk variasjon (inkludert 5-hydroksymetylcytosin, 5'-motiv, fragmentering, nukleosomspor, HIFI) i 3204 kliniske prøver og cfDNA.50 revaliderte HIFI-modeller med tre uavhengige tog-, test- og testsett viste stabil og pålitelig diskriminering mellom HCC- og ikke-HCC-populasjoner med henholdsvis 95,79 % og 95,42 % sensitivitet i HCC-spesifikke test- og testsett.Kjønnene var henholdsvis 95,00 % og 97,83 %.Den diagnostiske verdien av HIFI-metoden er høyere enn AFP når det gjelder å skille HCC fra skrumplever.I tillegg brukes ctDNA også i kirurgisk behandling.Atsushi et al.bestemte preoperative serumnivåer av ctDNA hos pasienter med HCC og fant at tilbakefallsfrekvensen og den ekstrahepatiske metastasefrekvensen i den cDNA-positive gruppen var signifikant høyere enn i den cDNA-negative gruppen, og cDNA-nivåene var signifikant korrelert.med tumorprogresjon.51 Som en svært sensitiv biomarkør, kan ctDNA forutsi evnen til HCC til å invadere kar.Wang et al.utført helgenomsekvensering av 46 pasienter med HCC, og multivariat analyse viste at terskelverdien for allelfrekvensen til cDNA-varianten for invasjon i mikrokar er 0,83 %, sensitivitet 89,7 % og spesifisitet 80,0 %.en uavhengig risikofaktor for mikrovaskulær invasjon i resektabel HCC, noe som tyder på at cDNA kan hjelpe til med å veilede optimal behandling.Avslutningsvis er ctDNA fullt implisert i forekomsten og utviklingen av HCC og kan brukes til tidlig screening, kirurgisk evaluering og sykdomsovervåking.
CTC-er er ondartede celler avledet fra primære svulster eller metastaser som metastaserer til blodet.Tumorceller skiller ut matrisemetalloproteinaser (MMP), som bryter ned basalmembranen, slik at tumorceller kan komme direkte inn i blodet og lymfekarene.Imidlertid elimineres de fleste CTC-er raskt av anoikis, immunangrep eller skjærstress.53 Den epiteliale-mesenkymale overgangen (EMT) gjør at CTC-er lett kan isoleres fra det primære tumorvevet, invadere kapillærer og oppnå betydelig forbedret overlevelse, metastaser, invasivitet og medikamentresistens.Studier har vist at det er dyp heterogenitet mellom de ulike tumorcellene i primære metastatiske svulster.Dermed kan CTC-analyse føre til en omfattende forståelse av tumorcelleheterogenitet.54
Spesifikke markører for HCC-assosierte CTC-er inkluderer glypican-3 (GPC3), asialoglykoproteinreseptor (ASGPR), epitelcelleadhesjonsmolekyl (EpCAM) og stamcelleassosierte markører som CD44, CD90, 55 og intercellulært adhesjonsmolekyl 1 (ICAM1).) .56 GPC3-markøren er et cellemembranforankret protein som brukes klinisk til patologisk analyse og karakterisering av HCC.57 Uttrykk av GPC3 er mer vanlig i HCC-tumorceller med middels og lav differensiering og fremmer ekstrahepatisk migrasjon;i tillegg indikerer tilstedeværelsen av GPC3+ CTC-er metastatisk HCC.58 ASGPR er et transmembranprotein uttrykt kun på overflaten av hepatocytter og er sterkt uttrykt i godt differensiert HCC.EpCAM er et av de mest brukte membranassosierte proteinene for å fange CTC-er.EpCAM har blitt identifisert som en overflatemarkør for HCC-celler med stamcellekarakteristikker,59 som korrelerer med ulike klinikopatologiske trekk ved HCC, som vaskulær invasjon, vurderte AFP-nivåer og avansert stadium av leverkreft ved Barcelona Hospital (BCLC).60 CTC EMT-fenotypen er svært metastatisk.54 EMT-prosesser i CTC fremmer HCC-metastase.Ekspresjon av EMT-markører som vimentin, twist, E-box sink finger binding (ZEB) 1, ZEB2, snegle, slug og E-cadherin har blitt studert i leveravledede CTCer fra HCC-pasienter.58 CanPatrol™-systemet utviklet av Cheng [61] klassifiserte CTC-er i tre fenotypiske undergrupper basert på overveiende uttrykte markører: epitelfenotype (EpCAM, CK8/18/19), mesenkymal fenotype (vimentin, kveilet) og blandet fenotype.Hos 176 pasienter var total CTC overlegen AFP ved å skille HCC fra benign leversykdom.AUC-verdiene for total CTC, AFP og kombinert total CTC og AFP var 0,774 (95 % KI, 0,704–0,834), 0,669 (95 % KI, 0,587–0,750) og 0,821 (95 % KI, 0,756–0,856–0. ).), henholdsvis.CTC-klassifisering basert på EMT kan forutsi HCC-diagnose, tidlig tilbakefall, metastaser og kortere total tid.
For tiden inkluderer metoder for å oppdage CSC-er fysiske metoder og biologiske metoder.Fysiske metoder, ofte referert til som berikelse basert på biofysiske egenskaper, avhenger hovedsakelig av de fysiske egenskapene til CSC, som størrelse, tetthet, ladning, mobilitet og deformerbarhet.Avhengig av de fysiske egenskapene finnes det ulike metoder som filtreringsbaserte systemer, dielektroforese osv. Sistnevnte, også kjent som immunaffinitetsbasert berikelse, er hovedsakelig basert på antigen-antistoffbinding siden metoden bruker antistoffer mot tumorspesifikke biomarkører. slik som EpCAM, ASGPR, human epidermal vekstfaktorreseptor 2 (HER2), prostataspesifikt antigen (PSA), humant pancytokeratin (P-CK) og karbamoylfosfatsyntase 1 (CPS1).62 En annen type, kalt no-anrichment-metoden, bruker flowcytometri for å skille CTC fra leukocytter basert på et høyere nukleært-til-cytoplasmatisk forhold og størrelse.Foreløpig er den eneste FDA-godkjente testen for påvisning av CTC-er Cell-Search™-systemet, som bruker EpCAM-celleoverflatemarkøren. Imidlertid kunne kombinert markørbasert CTC-deteksjon øke positivitetsraten.54 En blanding av antistoffer mot ASGPR og CPS1 oppnådde en CTC-deteksjonsrate på 91 % hos HCC-pasienter.63 Zhang et al brukte en CTC-Chip med antistoffer mot ASGPR, P -CK og CPS1, og differensierte HCC-pasienter fra de med godartet leversykdom eller ikke-HCC-kreft med en hastighet på 100 %.64 En studie av Wang oppdaget EpCAM+ CTC hos 60 % av 42 HCC-pasienter og fant signifikante korrelasjoner mellom begge positivitetene. rate og antall CTC-er med TNM-stadium.65 Guo et al fant at en CTC-avledet PCR-skåre var forhøyet hos 125/171 (73 %) pasienter hvis AFP-nivå var <20 ng/ml med en sensitivitet på 72,5 % og en spesifisitet på 95,0 %, sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved et grensesnitt på 20 ng/ml.66 Kombinasjonen av AFP og CTC kan forbedre HCC-deteksjon.45 Det antas at CTC har en fordel fremfor AFP ved tidlig screening av grupper med høy risiko for HCC. Imidlertid kunne kombinert markørbasert CTC-deteksjon øke positivitetsraten.54 En blanding av antistoffer mot ASGPR og CPS1 oppnådde en CTC-deteksjonsrate på 91 % hos HCC-pasienter.63 Zhang et al brukte en CTC-Chip med antistoffer mot ASGPR, P -CK og CPS1, og differensierte HCC-pasienter fra de med godartet leversykdom eller ikke-HCC-kreft med en hastighet på 100 %.64 En studie av Wang oppdaget EpCAM+ CTC hos 60 % av 42 HCC-pasienter og fant signifikante korrelasjoner mellom begge positivitetene. rate og antall CTC-er med TNM-stadium.65 Guo et al fant at en CTC-avledet PCR-skåre var forhøyet hos 125/171 (73 %) pasienter hvis AFP-nivå var <20 ng/ml med en sensitivitet på 72,5 % og en spesifisitet på 95,0 %, sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved et grensesnitt på 20 ng/ml.66 Kombinasjonen av AFP og CTC kan forbedre HCC-deteksjon.45 Det antas at CTC har en fordel fremfor AFP ved tidlig screening av grupper med høy risiko for HCC.Markørbasert kombinert deteksjon av CTC kan imidlertid øke prosentandelen av positive resultater.54 En blanding av anti-ASGPR- og CPS1-antistoffer oppnådde en CTC-deteksjonsrate på 91 % hos pasienter med HCC.63 Zhang et al.brukte en CTC-Chip med antistoffer mot ASGPR, P-CK og CPS1, og skilte også pasienter med HCC fra de med godartet leversykdom eller ikke-HCC med en hastighet på 100 %.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frekvens og antall CTC-er med TNM-stadium.65 Guo et al fant at PCR avledet fra CTC-er var forhøyet hos 125/171 (73 %) pasienter som hadde AFP-nivåer <20 ng/ml med en sensitivitet på 72,5 % og en spesifisitet på 95,0 % sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved et grensenivå på 20 ng/ml.66 Kombinasjonen av AFP og CTC kan forbedre påvisningen av HCC.45 CTC anses å ha en fordel fremfor AFP ved tidlig screening grupper.med høy risiko for HCC.Markørbasert kombinert deteksjon av CTC-er kan imidlertid øke prosentandelen av positive resultater.54 En blanding av anti-ASGPR- og CPS1-antistoffer oppnådde en 91 % CTC-deteksjonsrate hos pasienter med HCC.63 Zhang et al.brukte CTC-brikker med antistoffer mot ASGPR, P-CK og CPS1 og skilte pasienter med HCC fra benign leversykdom og ikke-HCC med 100 %.64 Wangs studie identifiserte 60 % av EpCAM+ CTC hos 42 HCC-pasienter og fant en signifikant sammenheng mellom forekomst og antall CTC på TNM-stadiet. 65 GUO 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 72,5%， 为 为 95,0%， 而 AFP 在值为20 ng/mL 时的特异性为为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 为 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/ml. fant at hos 125/171 (73 %) pasienter med AFP-nivåer <20 ng/ml, ble CTC-avledede PCR-verdier forhøyet med en sensitivitet på 72,5 % og en spesifisitet på 95,0 %, mens AFP var ved cut-off spesifisitet var 20 ng/ml.ml var 57,0 % og 90,0 %.66 Kombinasjonen av ORP og CTC forbedrer deteksjonen av HCC.45 CTC-er antas å være overlegne i forhold til AFP i tidlig screening av høyrisiko HCC-populasjoner.For CTC-positive og høyrisiko HCC-grupper bør derfor CTC-testing rutinemessig kombineres med ultralyd og AFP-deteksjon.Imidlertid anses CTC-er som viktige prediktorer for tumormetastaser og tilbakefall, og påvisning av CTC-er anbefales ikke uavhengig som et diagnostisk verktøy.62 Derfor kan CTC tjene som en bedre prediktiv biomarkør enn andre markører som brukes nå. Zhou et al fant at pasienter med forhøyet antall EpCAM+ CTC-er og regulatoriske T-celler viste en høyere risiko for å utvikle HCC-residiv enn de med lavt antall CTC-er, med et residivforhold på 66,7 % vs 10,3 % (P < 0,001).67 En lignende studie ble rapportert av Zhong et al.68 I tillegg fant Qi at 101 av 112 pasienter (90,81%) med HCC, inkludert de med tidlig sykdom, var positive for CTC og at svært små HCC-knuter ble oppdaget etter 3 til 5 måneders oppfølging. Zhou et al fant at pasienter med forhøyet antall EpCAM+ CTC-er og regulatoriske T-celler viste en høyere risiko for å utvikle HCC-residiv enn de med lavt antall CTC-er, med et residivforhold på 66,7 % vs 10,3 % (P < 0,001).67 A lignende studie ble rapportert av Zhong et al.68 I tillegg fant Qi at 101 av 112 pasienter (90,81 %) med HCC, inkludert de med sykdom i tidlig stadium, var positive for CTC og at svært små HCC-knuter ble oppdaget etter 3. 5 måneders oppfølging. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al fant at pasienter med forhøyede EpCAM+ CTCs og regulatoriske T-celler hadde en høyere risiko for HCC-residiv enn de med lav CTC, med en residivrate på 66,7 % vs. 10,3 % (P<0,001 )67.En lignende studie ble utført av Zhong et al.68. I tillegg fant Qi at 101 av 112 pasienter (90,81%) med HCC, inkludert de med tidlig sykdom, hadde CTC, og at svært små HCC-knuter ble oppdaget etter 3 til 5 måneders oppfølging. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001) 。。。。…… Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.fant at pasienter med forhøyede EpCAM+ CTCs og regulatoriske T-celler hadde høyere risiko for HCC-residiv sammenlignet med pasienter med færre CTCs, med residivrater på henholdsvis 66,7 % og 10,3 % (P < 0,001 ).En lignende studie ble rapportert av Zhong et al.68 I tillegg fant Qi at 101 av 112 HCC-pasienter (90,81%), inkludert pasienter med tidlig sykdom, hadde positive CTC-resultater og fant svært små HCC-knuter etter 3 besøk.Observasjon opptil 5 måneder.De fant også CTC hos 12 pasienter med kronisk HBV-infeksjon og fant små HCC-svulster innen 5 måneder hos 2 CTC-positive pasienter.69 Dermed kan CTC-er brukes til å forutsi HCC, 70 men de kan brukes mer rutinemessig som prediktive biomarkører.
I likhet med cfDNA frigjøres cfRNA til blodet gjennom ulike systemer.Disse molekylene i det perifere blodet representerer opprinnelseskreftvevet.Sammenlignet med markører oppdaget ved ikke-invasive metoder, er cfRNA-er mer dynamisk regulert, vevsspesifikke og rikelig i det ekstracellulære miljøet.Betydningen og diagnostisk verdi av 71 miRNA (miRNA) i HCC er rapportert i mange studier.miRNA-er er endogene ikke-kodende RNA-er (ncRNA-er) som regulerer ulike molekylærbiologiske aktiviteter ved å hemme translasjonen av målbudbringer-RNA (mRNA).miRNA er lokalisert i apoptotiske legemer innkapslet i eksosomer, men de kan også stabilt binde seg til serumproteiner og lipider i perifert blod og kan brukes til å evaluere HCC.mikroRNA er involvert i leverregenerering, lipidmetabolisme, apoptose, betennelse og utvikling av HCC.72 Onkogene miRNA som miR-21, miR-155 og miR-221 er godt kjent i HCC.Spesielt spiller miR-21 en nøkkelrolle i kollagensyntese i den ekstracellulære matrisen og fibrose og fremmer hepatokarsinogenese ved å aktivere hematopoietiske stamceller.72,73 Tumorsuppressor-miRNA-er i HCC inkluderer miRNA-122, miRNA-29, Let-7-familien og miRNA-15-familien.Let-7-familien består av mange tumorsuppressor-miRNA-er som er rettet mot RAS-familien.MiR-15-familien inkluderer miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 og miR-497, som har komplementære sekvenser for visse mRNA-er.I tillegg er lange ikke-kodende RNA-er (lncRNA-er) og sirkulære RNA-er (cirRNA-er) også viktige for tidlig screening av HCC.lncRNA representerer den bredeste klassen av ncRNA, inkludert mRNA-lignende ncRNA, og er involvert i patogenesen av mange menneskelige sykdommer.LncRNA spiller en regulerende rolle i leverens mikromiljø og kronisk leversykdom.74 CircRNA er også en klasse av ncRNA med flere funksjoner i reguleringen av genuttrykk.Nylig har circRNA blitt betraktet som diagnostiske verktøy for HCC.
Sirkulerende fritt RNA har bemerkelsesverdig stabilitet, inkludert motstand mot temperatur, pH og RNase, noe som gjør isoleringen av fnRNA fra perifert blod mindre kjedelig ved bruk av standard RNA-rensemetoder.De mest brukte metodene inkluderer NGS, microarray og RT-qPCR.NGS gjør at mikroRNA kan måles gjennom genomet.Denne metoden er imidlertid kostbar og analysen er ikke standardisert.I motsetning til dette er RT-qPCR billig, forsterker raskt nukleinsyrer og tilbyr mange fordeler som høyere følsomhet, høyere nøyaktighet, bredere dynamisk område og krever færre prøver.Mikroarrayer er en annen metode som brukes for miRNA-deteksjon basert på sensitiv og spesifikk hybridisering av mål-miRNA-er med komplementære DNA-prober, 75 men analyse av mikroarray-data er tidkrevende.
Sirkulerende miR-122 og Let-7 har blitt rapportert å være potensielt nyttige for å diagnostisere tidlig stadium HCC i høyrisikogrupper, markører hos pasienter med HBV-assosierte premaligne knuter og tidlig stadium HCC.76 Cai et al.funnet at medlemmer av Let-7-familien (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 og miR-199a/b) er i fare for kroniske HCC hos pasienter med hepatitt.Let-7-familien kan tjene som en effektiv surrogatbiomarkør for å forutsi utviklingen av HCC i høyrisikogrupper assosiert med kronisk hepatitt C. 77 miR-122 har høy diagnostisk nøyaktighet når det gjelder å oppdage tidlig HCC hos pasienter med levercirrhose.78 Serumsirkulerende MiR-107 har også blitt evaluert i de tidlige stadiene av HCC, 79 og har vist godt potensial i høyrisikopopulasjoner.Zhou et al rapporterte at et panel av miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a og miR-801) kan skille HCC fra kronisk hepatitt B (CHB) og skrumplever sensitivitet var henholdsvis 79,1 % og 75 %, og spesifisitet 76,4 % og 91,1 %.80 I HBV-relatert HCC fant vi at miR150-nivåene ble betydelig redusert sammenlignet med de hos kroniske HBV-pasienter uten HCC (sensitivitet 79,1 %, spesifisitet 76,5 %).-224 var forhøyet i HCC sammenlignet med friske kontroller, og undergruppeanalyser viste høyere nivåer hos pasienter med HCC assosiert med HBV.hepatitt B-assosiert cirrhose og HCC-pasienter identifiserte en siRNA-klassifisering som inneholder syv differensielt uttrykte siRNAer som kan oppdage HCC i forskjellige kontroller;AUC-området ved tidlig screening er bedre enn AFP-frivillige.De fant at fire miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p og miR-365a-3p) kunne skille pasienter med HCC fra pasienter uten HCC.Fem overuttrykkende miRNA-er (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p og miR-148a-3p) regnes som potensielle HBV-infeksjoner i HCC, cirrhose og CHB-biomarkører, spesielt miR-34a-5p kan være biomarkører for levercirrhose,85 og kan være potensielle biomarkører for tidlig screening av HCC i høyrisikopopulasjoner.Det mest studerte lncRNA i HCC er sterkt aktivert i leverkreft (HULC).Andre studier har vist at HULC som sirkulerer hos HCC-pasienter kan brukes som en diagnostisk markør fordi dette lncRNA-et er sterkt oppregulert hos HCC-pasienter sammenlignet med friske individer.71,86 Blant andre lnRNA-er regnes LINC00152 som det beste diagnostiske lncRNA-et på grunn av dets høye AUC, sensitivitet og spesifisitet.86 I en studie økte perifert blodekspresjon av LINC00152 gradvis fra normale friske kontroller til pasienter med CHB og cirrhose, og var til slutt høyest i HCC.Studier av uttrykket av circSMARCA5 i plasmaet til pasienter med HCC har vist en progressiv nedgang i uttrykket i HCC, alt fra hepatitt til cirrhose og precancerøse lesjoner.87 Analyse av ROC-kurver bekreftet potensialet til disse circRNA-ene for å skille pasienter med hepatitt eller levercirrhose fra de med HCC, spesielt de med AFP-nivåer under 200 ng/ml.I tillegg analyserte Zhu 13 617 sykliske RNA-er i plasmaprøver fra HBV-assosierte HCC-pasienter og bekreftet at 6 sykliske RNA-er ble uttrykt forskjellig i HCC og HBV-assosiert cirrhose, noe som tyder på at cRNA kan være fordelaktig.markører for tidlig screening av høyrisikogrupper som de som er assosiert med leversykdom, sklerosepasienter.88
Eksosomer er membranvesikler 40–160 nm i diameter;flere intracellulære vesikler smelter sammen med cellemembranen og frigjøres i den ekstracellulære matrisen.De inneholder mange aktive komponenter, inkludert lipider, proteiner, RNA og DNA, og spiller en nøkkelrolle i kommunikasjonen mellom celler, både HCC- og ikke-HCC-celler.89,90 Eksosomer regulerer progresjonen av HCC ved å aktivere hepatocyttfibroblaster og stellatceller, immunceller, normale hepatocytter og HCC-celler.91 I tumormikromiljøet produserer tumorceller et stort antall eksosomer som bæres fra kreftceller til umodne celler, som igjen er involvert i onkogenese, nedbrytning og cellulær signalering.92 Studier har vist at eksosomer kan overføre onkogener til normale celler under patologiske prosesser, som kan være en av mekanismene for tumorinvasjon og metastasering.93 Eksosomers rolle i kreftprogresjon kan være dynamisk og spesifikk for krefttype, 89 Eksosomer kan internaliseres av tilstøtende eller fjerne celler for å regulere flere målgener i mottakerceller som kan være involvert i intercellulære kommunikasjonsioner og cellulære mikromiljøinteraksjoner, de kan medierer cellulær signalering og metabolisme.94 Karakteristikker og dynamiske endringer av eksosomer lastmolekyler reflekterer direkte egenskapene og dynamiske forandringene til foreldrenes tumorceller,95 som også er grunnlaget for bruk av eksosomer i diagnostisering og prognose av kreft, samt for å forutsi individuell respons på kreftbehandling ..96
Tradisjonelle laboratoriemetoder for å isolere og analysere eksosomer er komplekse, flertrinns og tidkrevende, inkludert ultrasentrifugering, filtrering, størrelseseksklusjonskromatografi, immunaffinitetsrensing, Western blotting, enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA), PCR og strømningsanalyse.miniatyriserte systemer og lab-on-a-chip-plattformer som bruker mikro/nanoteknologi, utvikles mye for rask, praktisk in situ-isolering av eksosomer.Nanopartikkelsporingsanalyse (NTA) er en mye brukt metode for å karakterisere størrelsen og konsentrasjonen av eksosomer, inkludert metoder som magnetiske nanopartikler og polyhydroksyalkanoater.Mikrofluidiske og elektrokjemiske metoder kan også raskt oppdage eksosomer i høye utbytter.
Eksosomale proteiner er viktige markører for diagnostisering av HCC.I Arbelaiz-studien var nivået av 98 RasGAP SH3-bindende protein (G3BP) og polymer immunoglobulinreseptor (PIGR) signifikant forhøyet i HCC-avledede eksosomer, og den antatte kombinerte effekten av de to proteinene var overlegen den til AFP.Overbelastning av jern er en viktig faktor som bidrar til utviklingen av HCC.Tseng rapporterte at hepcidin kan spille en nøkkelrolle i resistens mot HCC.99 Eksosomer avledet fra sera fra HCC-pasienter hadde et betydelig høyere kopiantall av hepcidin-mRNA-varianter enn deres friske kolleger, noe som tyder på at hepcidin kan være en ny diagnostisk biomarkør for HCC.14-3-3ζ-proteinet i eksosomer produsert av 100 HCC kan redusere T-celleaktivering, proliferasjon og differensiering og kan indusere T-celletransformasjon til regulatoriske T-celler, noe som resulterer i T-celleutarming.101 Dette støttes av flere studier som undersøker tumorunndragelse fra immunovervåking, 102 som kan bidra til HCC-svulstdannelse.
I tillegg til tilstedeværelsen av ecRNA i plasma eller serum, kan RNA-anrikede eksosomer brukes til ikke-invasiv sanntidsstadie i tidlig tumorscreening og for å bestemme tumorutvikling og respons på terapi.Nivået av eksosomalt miRNA-21 i blodserumet i HCC-gruppen var 2,21 ganger høyere enn i CHB-gruppen, og i HCC-gruppen var det 5,57 ganger høyere enn i den friske befolkningen.I Wang-studien økte eksosomer signifikant HCC sammenlignet med cirrhotiske pasienter med AUC-verdier på 0,83 (95 % KI 0,74–0,93) og 0,94 (95 % KI 0,88–1,00).104 Dataene som ble oppnådd belyste involveringen av spesifikke eksosomale lastmolekyler i reguleringen av onkogenese og HCC-progresjon.105 Serumekspresjon av miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 og miR-26a er konsistent.og metastaser, og miR21-nivåene var mye høyere hos HCC-pasienter enn hos friske kontroller og også hos CHB-pasienter.102 LncRNA hadde potensiell diagnostisk verdi i HCC.Studier har vist at eksosomer avledet fra sera fra HCC-pasienter har betydelig høyere nivåer av LINC00161, LINC000635 og lncRNA aktivert ved å transformere vekstfaktor-β enn hos pasienter uten HCC, og disse lncRNA-ene er sterkt assosiert med TNM-stadium og tumorvolum.110 Conigliaro et al.CD90+-eksosomer ble funnet å uttrykke høye nivåer av lncRNAH19, som signifikant økte frigjøring av vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) og VEGF-R1-reseptorproduksjon, og stimulerer derved angiogenese.93 CircRNA er en annen type eksosomal ncRNA - uttrykt ved lavere, men stabile nivåer på tvers av arter, viser circRNA også spesifisitet for celletype, vevstype, utviklingsstadium og regulatorisk aktivitet.111 circRNA er diagnostiske biomarkører for tidlig og minimalt invasiv kreft.112 Nyere kliniske studier har vist at spesifisiteten til individuelle miRNA-er for å forutsi HCC ikke er ideell.Derfor kan kompleks deteksjon ved bruk av flere analyser (f.eks. miR-122 og miR-48a i kombinasjon med AFP) forbedre identifiseringen av tidlig HCC og differensieringen av HCC fra cirrhose.100
Pasienter med CHB og levercirrhose er den vanligste høyrisikogruppen for å utvikle HCC.For høyrisikogrupper, når en vedvarende virologisk respons er oppnådd, bør det utvikles en kostnadseffektiv overvåkingsstrategi basert på HCC-risiko, og tidlig screening er nøkkelen til å forbedre diagnosen og behandlingen av HCC med et høyt kostnadseffektivitetsforhold2 ..Tidlige screeningmetoder for kreft har mange begrensninger: effektive tidlige screeningmetoder er ikke utviklet for de fleste krefttyper, og etterlevelsen er vanligvis lav.Sammenlignet med tradisjonelle tidlige screeningmetoder har flytende biopsiteknologi åpenbare fordeler: enkel prøvetaking, panracdeteksjon, god prøvereproduserbarhet og effektiv respons på tumorheterogenitet.Gitt kostnadseffektiviteten til metodene knyttet til flytende biopsi, har bruken av dem i HCC-screening ikke blitt rutinemessig testet.Til tross for fremskritt innen nøyaktig deteksjon på molekylært nivå, er væskebiopsi kostbart å oppdage HCC hos målpasienter, noe som begrenser den utbredte bruken sammenlignet med spesifikke avbildningsprosedyrer som ultralyd og magnetisk resonansavbildning.113 114 En tidligere studie viste imidlertid at flytende biopsi viste en betydelig fordel i form av kvalitetsjusterte leveår (QALYs).115 Fordelene med flytende biopsi ved tidlig karsinom i mage og nasofarynx er også vist.116 117 Det nåværende synet er at flytende biopsi kan utfylle serumbiomarkører og radiologisk screening ved påvisning og diagnostisering av svulster.117 118
I følge gjeldende litteratur har væskebiopsiteknologi vist betydelig høyere sensitivitet og spesifisitet ved tidlig screening av høyrisikogrupper for leverkreft.Uavhengig av type væskebiopsi, kan den skille HCC fra individer med høy risiko uten HCC, noe som antyder viktigheten av tidlig screening da forskjeller mellom høyrisiko og friske individer er tydelige.ctDNA har en kort halveringstid og kan brukes til å oppdage HCC, så eventuelle endringer i tumor-avledet cDNA kan gi sanntids konkrete bevis på tumorprogresjon, spesielt for små svulster.Et høyt nivå av ctDNA indikerer utvikling og spredning av kreft og er en tidlig indikator på progresjon og tilbakefall.I tillegg kan pasienter, basert på resultatene av ctDNA, få individualisert behandling og oppfølging.119 Spesifikke metyleringssteder kan være en bedre markør enn AFP for tidlig identifisering av HCC og cirrhotiske knuter.I resekterbare tilfeller av HCC, er høye nivåer av cDNA en indikasjon på mikrovaskulær invasjon og postoperativt tilbakefall og metastaser.Endringer i kopiantall er assosiert med overlevelse av pasienter med HCC.Det kan antas at cDNA-evaluering kan være involvert i den generelle behandlingen av HCC, og cDNA kan tjene som en effektiv indikator på terapeutisk modulering.Markører basert på spesifikke genetiske mutasjoner i ctDNA har blitt tatt i bruk av kliniske retningslinjer for å forutsi effekt og overvåke medikamentresistens.ctDNA-testing kan være det mest nyttige flytende biopsiverktøyet for tidlig screening.CTC-er spiller også en nøkkelrolle i tidlig screening av høyrisiko-HCC-grupper.Ulike markører for HCC-assosierte CTC-er er av spesiell betydning ved utbrudd, utvikling og tilbakefall av HCC.Som membranvesikler er eksosomer involvert i intercellulær kommunikasjon, spesielt i HCC-celler.Sirkulerende mikroRNA er stabile i blodet og kan derfor være mer nyttige for tidlig screening av HCC.Gradvis ble eksosomale proteiner og RNA-rike eksosomer oppdaget, og deres prediktive effekt for HCC ble bekreftet.Interessant nok kan forskjellige etiologier av HCC også være assosiert med forskjellige mutasjoner, slik at vi kan velge forskjellige biomarkører for tidlig screening basert på forskjellige etiologier av HCC.120
Nåværende væskebiopsiteknikker er imidlertid tvilsomme når det gjelder stabilitet og kan ikke uavhengig utføre tidlig screening eller overvåking av HCC, men kan fortsatt utfylle individuell screening og diagnose.121 Som en form for flytende biopsi har påvisning og avbildning av ctDNA, CTC, cfRNA og exosomassosiert AFP eller PIVKA-II lovende anvendelser i tidlig diagnose og prognose av HCC.Den nøyaktige mekanismen for ctDNA-frigjøring i blodet gjenstår imidlertid å bli belyst.Å avsløre de grunnleggende biologiske egenskapene til ctDNA kan lette bruken som markør.Den lille mengden ctDNA i sirkulasjonen og strenge prøvehåndteringskrav er utfordringer for den kliniske implementeringen av cDNA-deteksjon i HCC.I tillegg har ikke genetiske mutasjoner spesifikke egenskaper som tillater nøyaktig identifikasjon av kreftfremkallende stoffer.Siden flere genetiske og somatiske varianter også er tilstede i normalt vev, kan genetiske mutasjoner identifisert ved væskebiopsi være av begrenset nytte i tidlig screening for HCC.122 Begrensningene til veldefinerte nyttige genmål og biomarkører som hjelper til med å differensiere cDNA fra ikke-tumor-DNA er de viktigste problemene ved bruk av cDNA.mangel på nytte av sensitive og spesifikke markører for påvisning av CTC.Bare levedyktige celler med metastatisk potensial ble funnet, og den optimale kombinasjonen av CSC-anrikede markører var uklar.Isolering av CTC-er for kultur og evaluering av mutasjonsprofilene deres er også en utfordrende oppgave.På grunn av problemer med identifisering, isolering og rensing av eksosomer, er den spesifikke molekylære mekanismen fortsatt uklar, og tidligere studier på mekanismen til eksosomer og HCC har ikke vært i dybden, og måten miRNA, lncRNA og proteiner er sortert i eksosomer , og det er ikke klart om eksosomopptak er en bestemt type prosess.Bruken av eksosomer for diagnostisering og behandling av HCC er fortsatt på det prekliniske stadiet.Mangelen på standardisering av flytende biopsiprosedyrer, slik som typen rør som brukes til å samle blod, blodvolum, prøvelagring og deteksjon, isolering og berikelse, kan utelukke bruken av dem i rutinemessig klinisk praksis på grunn av forskjeller i praksis på tvers av medisinske sentre.Effekten av flytende biopsi i tidlig screening, diagnose, effektivitetsevaluering og prediksjon av HCC gjenstår å utforske, spesielt for høyrisikogrupper.Flytende biopsiteknologi har et stort potensial og forventes å bli mye brukt i klinisk praksis av leverkreft i nær fremtid.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimerer forekomst og dødelighet fra 36 typer kreft i 185 land.CA Kreft J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Hovedkvarter for National Health Commission.Kriterier for diagnostisering og behandling av primær leverkreft (2022-utgave) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Retningslinjer for diagnose og behandling av hepatocellulært karsinom (2019-utgaven).Leverkreft.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Retningslinjer for klinisk praksis for hepatocellulært karsinom: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4th guidelines), 2019-oppdatering.Leversykdomsreservoar.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Flytende biopsi ved kronisk leversykdom.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Flytende brystkreftbiopsi: en fokusert gjennomgang.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Overvåking for hepatocellulært karsinom: nåværende beste praksis og fremtidige retninger.Gastroenterologi.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliniske retningslinjer EASL-EORTC: behandling av hepatocellulært karsinom.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Kombinert analyse av AFP og HCCR-1 som nyttige serologiske markører i små hepatocellulært karsinom: en prospektiv kohortstudie.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Differensiell ekspresjon av plasma mikroRNA-125b i hepatitt B-virus-assosiert leversykdom og diagnostisk potensial for hepatitt B-virus-indusert hepatocellulært karsinom.Leversykdomsreservoar.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologi og betydningen av alfa-fetoprotein i hepatocellulært karsinom.Lever int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Kliniske retningslinjer for behandling av hepatocellulært karsinom i Asia-Stillehavsregionen: 2017-oppdatering.Den internasjonale organisasjonen for leversykdommer.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Diagnostisk verdi av serum PIVKA-II alene eller i kombinasjon med AFP hos kinesiske pasienter med hepatocellulært karsinom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Ikke-småcellet lungekreft biopsi av ikke-plasma humoral væske: nærmere svulsten!celle.2020; 9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Flytende biopsi: nåværende status og fremtidsutsikter.Behandling Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Væskebasert kreftbiopsi: et multimodalt diagnostisk verktøy i klinisk onkologi.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinsyrer i humant plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Avansert deteksjon av sirkulerende tumor-DNA ved fragmentstørrelsesanalyse.Vitenskap oversetter medisin.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Lengde på sirkulerende tumor-DNA-fragment.PLOS gener.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Sirkulerende tumor-DNA: en lovende biomarkør i væskebasert kreftbiopsi.målsvulst.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Påvisning av sirkulerende tumor-DNA i tidlige og sene stadier av humane maligniteter.Vitenskap oversetter medisin.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Flytende biopsi for mutasjonsprediktiv analyse av solid kreft: en patologs perspektiv.J Bioteknologi.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Tidlig tumordeteksjon ved sirkulerende plasma-DNA-screening: hype eller håp?Belgisk klinisk lov.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Effekt av hepatittvirus og aldring på DNA-metylering i human hepatokarsinogenese.Histopatologi.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647